Southern Blot
Southern Blot
Tanım
DNA molekül karışımları içindeki spesifik bir DNA dizilimini jel elektroforezi ve nükleik asit hibridizasyonu yoluyla tespit etmeye yarayan laboratuvar yöntemidir.
Örnek Vaka / Uygulama
Klinik genetik laboratuvarında, ailesel bir genetik bozukluktan şüphelenilen bir hastadan alınan kan örneği izole edilir. DNA restriksiyon enzimleri ile kesildikten sonra jelde yürütülür ve membrana aktarılır. İşaretli spesifik prob eklendiğinde, ilgili gen bölgesinde mutasyon veya delesyon olup olmadığı film veya floresan görüntüleme ile tespit edilir.
Derin Analiz
Southern blot, moleküler biyoloji ve genetik alanında temel bir analitik tekniktir. Süreç temel olarak üç aşamadan oluşur: DNA örneklerinin restriksiyon endonükleaz enzimleri ile kesilmesi, agaroz jel elektroforezi ile moleküler boyuta göre ayrıştırılması ve ayrılan DNA'nın kılcal hareketle bir nitroasetat veya naylon membrana transfer edilmesi. Ardından, radyoaktif veya floresanla işaretlenmiş hedef özgül bir DNA/RNA probu eklenerek tamamlayıcı baz eşleşmesi (hibridizasyon) sağlanır. Bu mekanizma, karmaşık bir genomik havuz içinde tek bir genin veya genetik varyasyonun varlığını ve miktarını saptamaya olanak tanır. Günümüzde yerini sıklıkla PCR tabanlı yöntemlere bırakmış olmasına rağmen, genetik haritalama ve transgenik analizlerde referans bir teknik olmayı sürdürmektedir.
Etimoloji
Karıştırmayın
Northern blot ve Western blot teknikleri ile sıklıkla karıştırılır. Southern blot DNA'yı hedeflerken, Northern blot RNA'yı (gen ekspresyonu için), Western blot ise proteinleri tespit etmek amacıyla kullanılır.
Keşfetmeye Devam Edin
Northern Blot
Northern Blot
Northern Blot
Doku ekstraktlarındaki belirli bir RNA molekülünü jel elektroforezi ve nükleotit prob hibridizasyonu yoluyla tespit etmek için kullanılan moleküler analiz yöntemidir.
İncele
Western Blot
Western Blot
Western Blot
Karmaşık bir biyolojik örnek içerisindeki belirli bir protein molekülünü jel elektroforezi ve spesifik antikor etkileşimi yoluyla tespit etmeye yarayan analitik bir laboratuvar tekniğidir.
İncele
Jel Elektroforezi
Jel Elektroforezi
Gel Electrophoresis
Farklı boyut veya elektriksel yüke sahip moleküllerin, bir elektrik alanının etkisi altında jel matrisinden geçirilerek ayrıştırılmasında kullanılan analitik laboratuvar yöntemidir.
İncele