Western Blot
Western Blot
Tanım
Karmaşık bir biyolojik örnek içerisindeki belirli bir protein molekülünü jel elektroforezi ve spesifik antikor etkileşimi yoluyla tespit etmeye yarayan analitik bir laboratuvar tekniğidir.
Örnek Vaka / Uygulama
Bir nörobiyoloji laboratuvarında, Alzheimer modeli farelerin hipokampüs dokularındaki tau protein fosforilasyon miktarını inceleyen araştırmacılar, doku örneklerini lizis tamponuyla çözüp proteinlerini ekstrakte ederler. Jel elektroforezi ile ayrıştırıp membrana aktardıktan sonra anti-fosfo-tau antikoru ile işaretleme yaparak, kontrol grubuna kıyasla patolojik protein birikimini kantitatif olarak tespit ederler.
Derin Analiz
Western blot, moleküler biyoloji, immünogenetik ve nörobiyoloji laboratuvarlarında protein ekspresyon düzeylerini incelemek için kullanılan temel bir immünolojik yöntemdir. Süreç, doku veya hücre homojenatından elde edilen protein karışımının sodyum dodesil sülfat-poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) ile moleküler ağırlıklarına göre ayrıştırılmasıyla başlar. Ardından bu proteinler, nitroselüloz veya PVDF membrana transfer edilir. Membranın boş alanları bloke edildikten sonra, hedef proteine özgü bir birincil antikor ile inkübe edilir. Son aşamada, enzimatik (örn. Horseradish Peroksidaz - HRP) veya floresan işaretli ikincil antikorlar kullanılarak hedef proteinin varlığı kimyasal lüminesans veya kolorimetrik yöntemlerle görünür kılınır. Bu teknik, nörobilimde nörotransmitter reseptör yoğunluklarının veya sinaptik protein değişimlerinin ölçülmesinde kritik öneme sahiptir.
Karıştırmayın
Southern blot (DNA analizi için kullanılır) ve Northern blot (RNA analizi için kullanılır). Western blot ise özel olarak proteinleri tespit etmek amacıyla tasarlanmıştır.
Keşfetmeye Devam Edin
Jel Elektroforezi
Jel Elektroforezi
Gel Electrophoresis
Farklı boyut veya elektriksel yüke sahip moleküllerin, bir elektrik alanının etkisi altında jel matrisinden geçirilerek ayrıştırılmasında kullanılan analitik laboratuvar yöntemidir.
İncele
Antikor
Antikor
Antibody
B lenfositleri tarafından üretilen ve spesifik antijenlerle etkileşime girerek onları etkisiz hale getiren modifiye edilmiş glikoprotein yapısındaki molekül.
İncele