Northern Blot
Northern Blot
Tanım
Doku ekstraktlarındaki belirli bir RNA molekülünü jel elektroforezi ve nükleotit prob hibridizasyonu yoluyla tespit etmek için kullanılan moleküler analiz yöntemidir.
Örnek Vaka / Uygulama
Bir nörobiyoloji laboratuvarında, kronik stresin hipokampüsteki belirli bir nörotrofik faktörün (örneğin BDNF) mRNA ekspresyonu üzerindeki etkisini inceleyen bir araştırmacı, farklı gruplardan elde ettiği toplam RNA örneklerini Northern blot kullanarak analiz eder ve stres grubunda transkripsiyon seviyelerinin düştüğünü görselleştirir.
Derin Analiz
Northern blot, gen ekspresyon düzeylerinin kalitatif ve kantitatif olarak incelenmesinde kullanılan temel bir moleküler biyoloji tekniğidir. Süreç, karmaşık bir RNA karışımının agaroz jel üzerinde elektroforezle moleküler boyutlarına göre ayrılmasıyla başlar. Ayrılan RNA'lar, daha sonra kılcal hareket veya vakum yardımıyla bir nitroselüloz ya da naylon membrana transfer edilir. Hedef RNA dizisini tespit etmek için, radyoaktif veya floresan işaretli tamamlayıcı bir nükleotit prob (cDNA veya cRNA) eklenerek hibridizasyon gerçekleştirilir. Son aşamada, otoradyografi veya floresan görüntüleme yöntemleriyle hedef RNA-prob hibritleri görselleştirilir. Bu yöntem, transkripsiyon seviyelerindeki değişimlerin ve alternatif kırpılma (alternative splicing) olaylarının izlenmesinde kritik bir rol oynamasına rağmen, günümüzde kantitatif PZR (qPCR) ve RNA dizileme (RNA-seq) gibi daha yüksek hassasiyetli tekniklerin gelişmesiyle büyük ölçüde yerini bu yeni nesil yöntemlere bırakmıştır.
Etimoloji
Southern blot (DNA analizi yöntemi) metodolojisine bir atıf olarak, yön (kuzey) esprisiyle türetilmiş moleküler biyoloji terimidir (Southern adı, yöntemi geliştiren Edwin Southern'dan gelir; Northern ise analitik benzerlik nedeniyle esprili bir yöneliktir).
Karıştırmayın
Southern blot (DNA analizi için kullanılır) ve Western blot (protein analizi için kullanılır). Temel ayırt edici fark, Northern blot'un hedef molekül olarak DNA veya protein yerine spesifik RNA (mRNA) fragmanlarını hedef almasıdır.
Keşfetmeye Devam Edin
Southern Blot
Southern Blot
Southern Blot
DNA molekül karışımları içindeki spesifik bir DNA dizilimini jel elektroforezi ve nükleik asit hibridizasyonu yoluyla tespit etmeye yarayan laboratuvar yöntemidir.
İncele
Western Blot
Western Blot
Western Blot
Karmaşık bir biyolojik örnek içerisindeki belirli bir protein molekülünü jel elektroforezi ve spesifik antikor etkileşimi yoluyla tespit etmeye yarayan analitik bir laboratuvar tekniğidir.
İncele
Jel Elektroforezi
Jel Elektroforezi
Gel Electrophoresis
Farklı boyut veya elektriksel yüke sahip moleküllerin, bir elektrik alanının etkisi altında jel matrisinden geçirilerek ayrıştırılmasında kullanılan analitik laboratuvar yöntemidir.
İncele